zabmedvestnikЗабайкальский медицинский вестникTransbaikalian Medical Bulletin1998-6173Читинская государственная медицинская академия10.52485/19986173_2022_4_1zabmedvestnik-93Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯORIGINAL RESEARCHСодержание NK и NKT- лимфоцитов и их коагрегатов с тромбоцитами в периферической крови здоровых детей разного возрастаContent of NK and NKT-lymphocytes and their coaggregates with platelets in the peripheral blood of healthy children of different agesБогомягковаЕ. Н.BogomyagkovaE. N.

672000, г. Чита, ул. Горького, 39а

39a Gorky Street, Chita, 672000

СолповА. В.SolpovA. V.

672000, г. Чита, ул. Горького, 39а

39a Gorky Street, Chita, 672000

ТерешковП. П.TereshkovP. P.

672000, г. Чита, ул. Горького, 39а

39a Gorky Street, Chita, 672000

ВитковскийЮ. А.VitkovskyYu. A.

672000, г. Чита, ул. Горького, 39а

39a Gorky Street, Chita, 672000

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Читинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской ФедерацииРоссияChita State Medical AcademyRussian Federation20220208202404111Copyright © Богомягкова Е.Н., Солпов А.В., Терешков П.П., Витковский Ю.А., 20242024Богомягкова Е.Н., Солпов А.В., Терешков П.П., Витковский Ю.А.Bogomyagkova E.N., Solpov A.V., Tereshkov P.P., Vitkovsky Y.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.zabmedvestnik.ru/jour/article/view/93Цель исследования

Цель исследования. Определить содержание натуральных киллеров (NK-лимфоцитов) и натуральных киллеров Т-лимфоцитов (NKT-лимфоцитов) и их коагрегатов с тромбоцитами PNKcelC (Platelet NK-cells Co-aggregates), PNKTcelC (Platelet NKT-cells Co-aggregates) в периферической крови здоровых детей разного возраста при помощи проточной цитофлуориметрии.

Материалы и методы

Материалы и методы. Проведено исследование цельной крови 111 здоровых детей в возрасте от 7 месяцев до 14 лет. Периферическую кровь детей забирали в вакуумные пробирки с ЭДТА. Для выявления основных популяций и субпопуляций лимфоцитов, тромбоцитарно-лимфоцитарных коагрегатов применялись моноклональные антитела, конъюгированные с различными флуорохромами. Определение исследуемых параметров проводили с использованием метода проточной цитофлуориметрии. Для сравнения всех 6 исследуемых групп по одному количественному признаку применялся критерий Краскела–Уоллиса (H). При наличии статистически значимых различий проводилось попарное сравнение с помощью критерия Манна-Уитни (U) с поправкой Бонферрони.

Результаты

Результаты. Относительное содержание NK-клеток в периферической крови было минимальным у детей первого года жизни и постепенно возрастало к 12 годам. Абсолютное содержание NK-лимфоцитов оставалось неизменным во всех возрастных группах. Абсолютное и относительное содержание NKТ-клеток постепенно повышалось с возрастом, достигая максимальных значений у детей 12 лет. Впервые установлено, что абсолютное содержание PNKTcelC было минимальным у детей в возрасте 1-2 года и максимальным у детей в возрасте от 2 до 6 лет. При этом абсолютное содержание PNKcelC оставалось неизменным во всех возрастных группах. Однако относительное содержание PNKcelC находилось на стабильно низком уровне практически во всех обследуемых возрастных группах, кроме детей в возрасте от 1 года до 2 лет, у которых наблюдалось значительное увеличение этого показателя.

Заключение

Заключение. Содержание NK и NKT-клеток, а также PNKcelC, PNKTcelC зависит от возраста детей.

Aim

Aim. To determine the content of natural killer cells (NK-lymphocytes) and natural killer T-lymphocytes (NKT-lymphocytes) and their co-aggregates with platelets PNKcelC (Platelet NK-cells Co-aggregates), PNKTcelC (Platelet NKT-cells Co-aggregates) in the peripheral blood of healthy children of different ages by flow cytometry.

Methods

Methods. Simples of whole blood of 111 healthy children in age up 7 months to 14 years were studied. Peripheral blood of children was taken into vacuum tubes with EDTA. Monoclonal antibodies to cell markers of platelets and lymphocytes were used to determine the platelet-cells contacts by flow cytometry method. The Kruskal–Wallis test (H), Mann–Whitney (U) test with the Bonferroni correction were applied.

Results

Results. The relative content of NK cells in the peripheral blood was minimal in children of the first year of life and gradually increased by the age of 12. The absolute content of NK-lymphocytes did not change in all age groups. The absolute and relative content of NKT cells gradually increased in children as they grow older and reach maximum values in 12-year-old. It was established for the first time that the absolute content of PNKTcelC was minimal in 1–2 years old and maximal in 2–6 in children. At the same time, the absolute content of PNKcelC did not change in all groups. However, the relative content of PNKcelC had constant low level in all studied groups, except grope of children 2 years old; in those this indicator was increased.

Conclusions

Conclusions. The content of NK and NKT cells, as well as PNKcelC, PNKTcelC depend on age.

NK-лимфоцитыNKT-лимфоцитытромбоцитарно-лимфоцитарные коагрегатыздоровые детиNK-lymphocytesNKT-lymphocytesplatelet-lymphocyte co-aggregateshealthy childrenReferencesZahran, A.M., Saad, K., Elsayh, K.I. et al. Upregulation of Cytotoxic T-cells in pediatric patients with Gaucher disease. SciRep. 2022. 12. 4977. https://doi.org/10.1038/s41598-022-08843-4Zahran, A.M., Saad, K., Elsayh, K.I. et al. Upregulation of Cytotoxic T-cells in pediatric patients with Gaucher disease. SciRep. 2022. 2. 4977. https://doi.org/10.1038/s41598-022-08843-4.Freud, AG; Mundy-Bosse, B.L.; Yu, J.; Caligiuri, M.A. Broad spectrum of human natural killer cell diversity. Immunity. 2017. 47. 820–833.Freud, AG; Mundy-Bosse, B.L.; Yu, J.; Caligiuri, M.A. Broad spectrum of human natural killer cell diversity. Immunity. 2017. 47. 820–833.Chen, Yu.; Lu, D.; Churov, A.; Fu, R. Progress in research on NK cell receptors and their signaling pathways. Mediat. Inflammation. 2020. 6437057.Chen, Yu.; Lu, D.; Churov, A.; Fu, R. Progress in research on NK cell receptors and their signaling pathways. Mediat. Inflammation. 2020. 6437057.Schwane, W.; Hyun-Tran, V.H.; Vollmers, S.; Yakup, V.M.; Sauter, J.; Schmidt, A.H.; Payne, S.; Altfeld, M.; Richert, L.; Koerner, K. Distinguishing features in the receptor repertoireDistinguish between CD56bright and CD56dim natural killer cells. Front. Immunol. 2020. 11. 568927.Schwane, W.; Hyun-Tran, V.H.; Vollmers, S.; Yakup, V.M.; Sauter, J.; Schmidt, A.H.; Payne, S.; Altfeld, M.; Richert, L.; Koerner, K. Distinguishing features in the receptor repertoire Distinguish between CD56bright and CD56dim natural killer cells. Front. Immunol. 2020. 11. 568927.Zahran AM, Abdel-Rahim MH, Elsayh KI, Hassanien MM, Mahran SA, Hetta HF. Natural Killer and Natural Killer T Cells in Juvenile Systemic Lupus Erythematosus: Relation to Disease Activity and Progression. Arch Immunol Ther Exp (Warsz). 2019. 67(3). 161-169. doi: 10.1007/s00005-019-00537-6.Zahran AM, Abdel-Rahim MH, Elsayh KI, Hassanien MM, Mahran SA, Hetta HF. Natural Killer and Natural Killer T Cells in Juvenile Systemic Lupus Erythematosus: Relation to Disease Activity and Progression. Arch ImmunolTherExp (Warsz). 2019. 67(3). 161-169. doi: 10.1007/s00005-019-00537-6.Zhou, J.; Tian, Z.; Peng, H. Tissue-resident NK cells and other innate lymphoid cells. Add. Immunol. 2020. 145. 37–53.Zhou, J.; Tian, Z.; Peng, H. Tissue-resident NK cells and other innate lymphoid cells. Add. Immunol. 2020. 145. 37–53.Hashemi, E.; Malarkannan, S. Tissue-resident NK cells: development, maturation, and clinical relevance. Cancers. 2020. 12. 1553.Hashemi, E.; Malarkannan, S. Tissue-resident NK cells: development, maturation, and clinical relevance. Cancers. 2020. 12. 1553.Mezger M., Nording H., Sauter R. et al.Platelets and immune responses during thromboinÀammation. Front Immunol. 2019. 10. 1731. DOI: https://www.doi.org/10.3389/¿mmu.2019.01731.Mezger M., Nording H., Sauter R. et al.Platelets and immune responses during thromboinÀammation. Front Immunol. 2019. 10. 1731. DOI: https://www.doi.org/10.3389/¿mmu.2019.01731Lukasik Z.M., Makowski M., Makowska J.S. From blood coagulation to innate and adaptive immunity: the role of platelets in the physiology and pathology of autoimmune disorders. Rheumatol. Int. 2018. 38 (6). 959–74. DOI: https://www.doi.org/10.1007/s00296-018-4001-9.Lukasik Z.M., Makowski M., Makowska J.S. From blood coagulation to innate and adaptive immunity: the role of platelets in the physiology and pathology of autoimmune disorders. Rheumatol. Int. 2018. 38 (6). 959–74. DOI: https://www.doi.org/10.1007/s00296-018-4001-9.Кузник Б.И., Батожаргалова Б.Ц., Витковский Ю.А. Состояние иммунитета и лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии у детей с хроническим деформирующим бронхитом. Медицинская иммунология. 2008. 10 (6). 583–588.Kuznik B.I., Batozhargalova B.Ts., Vitkovsky Yu.A. The state of immunity and lymphocytic- platelet adhesion in children with chronic deforming bronchitis. Medical immunology. 2008. 10(6). 583–588. in Russian.Долина А.Б., Кузник Б.И., Розенберг В.Я., Вишнякова Т.М., Витковский Ю.А. Влияние тималина на состояние иммунитета и лимфоцитарно-тромбоцитарную адгезию у детей с вторичным инфекционным эндокардитом. Медицинская иммунология. 2010. 12(4-5). 381- 386. https://doi.org/10.15789/1563-0625-2010-4-5-381-386.Dolina A.B., Kuznik B.I., Rozenberg V.Ya., Vishnyakova T.M., Vitkovsky Yu.A. Influence of thymalin on the state of immunity and lymphocytic-platelet adhesion in children with secondary infective endocarditis. Medical immunology. 2010. 12(4-5). 381-386. https://doi.org/10.15789/1563-0625-2010-4-5-381-386.Витковский Ю.А., Кузник Б.И., Солпов А.В. Феномен лимфоцитарно-тромбоцитарного розеткообразования. Иммунология. 1999. (4). 35–7.Vitkovsky Yu.A., Kuznik B.I., Solpov A.V. Phenomenon of lymphocytic-platelet rosette formation. Immunology. 1999. (4). 35–7. in Russian.Витковский Ю.А., Кузник Б.И., Солпов А.В. Патогенетическое значение лимфоцитарно- тромбоцитарной адгезии. Медицинская иммунология. 2006. 8(5–6). 745–3.Vitkovsky Yu.A., Kuznik B.I., Solpov A.V. Pathogenetic significance of lymphocytic-platelet adhesion. Medical immunology. 2006. 8(5–6). 745–3. in Russian.Solpov A., Shenkman B., Vitkovsky Y., Brill G., Koltakov A., Farzam N., Varon D., Bank I., Savion N. Platelets enhance CD4+ lymphocyte adhesion to extracellular matrix under fl ow conditions: role of platelet aggregation, integrins, and non-integrin receptors. Thromb. Haemost. 2006. 95 (5). 815–21.Solpov A., Shenkman B., Vitkovsky Y., Brill G., Koltakov A., Farzam N., Varon D., Bank I., SavionN. Platelets enhance CD4+ lymphocyte adhesion to extracellular matrix under fl ow conditions: role of platelet aggregation, integrins, and non-integrin receptors. Thromb. Haemost. 2006. 95 (5). 815–21.Кузник Б.И., ВитковскийЮ.А., Солпов А.В. Адгезивные молекулы и лейкоцитарно- тромбоцитарные взаимодействия. Вестник гематологии. 2006. 2 (2). 42–55.Kuznik B.I., Vitkovsky Yu.A., Solpov A.V. Adhesive molecules and leukocyte-platelet interactions. Bulletin of hematology. 2006. 2(2). 42–55. in Russian.Shenkman B., Brill G., Solpov A.,Vitkovsky Y., Kuznik B., Koltakov A., Kotev-Emeth S., Savion N., Bank I. CD4+ lymphocytes require platelets for adhesion to immobilized fi bronectin in fl ow: role of beta (1) (CD29)-, beta(2) (CD18)-related integrin’s and non-integrin receptors. Cell. Immunol. 2006. 242 (1). 52–9. DOI: https://doi.org/10.1016/j.cellimm.2006.09.005.Shenkman B., Brill G., Solpov A.,Vitkovsky Y., Kuznik B., Koltakov A., Kotev-Emeth S., Savion N., Bank I. CD4+ lymphocytes require platelets for adhesion to immobilized fi bronectin in fl ow: role of beta (1) (CD29)-, beta(2) (CD18)-related integrin’s and non-integrin receptors. Cell. Immunol. 2006. 242(1). 52–9. DOI: https://doi.org/10.1016/j.cellimm.2006.09.005Солпова О.А., Аветисян М.А., Терешков П.П., Солпов А.В., Витковский Ю.А. Участие TCRαβ- и γδ-T-лимфоцитов, P-селектинав формировании клеточно-тромбоцитарных коагрегатов. Забайкальский медицинский вестник. 2016. 2. 71–9.Solpova O.A., Avetisyan M.A., Tereshkov P.P., Solpov A.V., Vitkovsky Yu.A. Participation of TCRαβ- and γδ-T-lymphocytes, P-selectin in the formation of cell-platelet coaggregates. Transbaikal Medical Bulletin. 2016. (2). 71–9. in Russian.Хайдуков С.В., Байдун Л.А., Зурочка А.В., Тотолян А.А. Стандартизованная технология «исследование субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови с применением проточных цитофлюориметров-анализаторов» (ПРОЕКТ). Медицинская иммунология. 2012. 14 (3). 255–68.Khaidukov S.V., Baidun L.A., Zurochka A.V., Totolyan A.A. Standardized technology "study of the subpopulation composition of peripheral blood lymphocytes using flow cytofluorometer- analyzers" (PROJECT). Medical immunology. 2012. 14(3). 255–68. in Russian.Ding Y., Zhou L., Xia Yu., Song H., Yang J., Zhao X. Reference values for peripheral blood lymphocyte subsets of healthy children in China. Journal of allergologyand clinical immunology. 2018. DOI: https://doi.org/10.1016/j.jaci.2018.04.022Ding Y., Zhou L., Xia Yu., Song H., Yang J., Zhao X. Reference values for peripheral blood lymphocyte subsets of healthy children in China. Journal of allergologyand clinical immunology. 2018. DOI: https://doi.org/10.1016/j.jaci.2018.04.022Lerkvaleekul B., Apiwattanakul N., Klinmalai C., HongengS.,Vilaiyuk S. Age-related changes in lymphocyte subpopulations in healthy Thai children. J. Clin. Lab. Anal. 2020. 34(5). e23156. DOI: https://www.doi.org/10.1002/jcla.23156.Lerkvaleekul B., Apiwattanakul N., Klinmalai C., HongengS.,Vilaiyuk S. Age-related changes in lymphocyte subpopulations in healthy Thai children. J. Clin. Lab. Anal. 2020. 34 (5). e23156. DOI: https://www.doi.org/10.1002/jcla.23156Valiathan R., Ashman M., Asthana D. Effects of Ageing on the Immune System: Infants to Elderly. Scand J Immunol. 2016. 83 (4). 255–66. DOI:https://doi.org/10.1111/sji.12413.Valiathan R., Ashman M., Asthana D. Effects of Ageing on the Immune System: Infants to Elderly. Scand J Immunol. 2016. 83 (4). 255–66. DOI:https://doi.org/10.1111/sji.12413Розенберг В.Я., Бутыльский А.Н., Кузник Б.И. Возрастная динамика показателей гемограммы и иммунного статуса у детей различного возраста. Медицинская иммунология. 2011. 13(2-3). 261-266. https://doi.org/10.15789/1563-0625-2011-2-3-261-266.Rosenberg V.Ya., Butyl'skii A.N., Kuznik B.I. Age dynamics of hemogram and immune status in children of different ages. Medical immunology. 2011. 13(2-3). 261-266. https://doi.org/10.15789/1563-0625-2011-2-3-261-266. in Russian.Tosato F., Bucciol G., Pantano G., Putti M.C., Sanzari M.C., Basso G., Plebani M. Lymphocytes subsets reference values in childhood. Cytometry A. 2015. 87 (1). 81–5. DOI: https://doi.org/10.1002/cyto.a.22520.Tosato F., Bucciol G., Pantano G., Putti M.C., Sanzari M.C., Basso G., Plebani M. Lymphocytes subsets reference values in childhood. Cytometry A. 2015. 87 (1). 81–5. DOI: https://doi.org/10.1002/cyto.a.22520Shearer WT, Rosenblatt HM, Gelman RS, Oyomopito R, Plaeger S, Stiehm ER, Wara DW, Douglas SD, Luzuriaga K, McFarland EJ, Yogev R, Rathore MH, Levy W, Graham BL, Spector SA; Pediatric AIDS Clinical Trials Group. Lymphocyte subsets in healthy children from birth through 18 years of age: the Pediatric AIDS Clinical Trials Group P1009 study. J AllergyClinImmunol. 2003. 112(5). 973-80. doi: 10.1016/j.jaci.2003.07.003.Shearer WT, Rosenblatt HM, Gelman RS, Oyomopito R, Plaeger S, Stiehm ER, Wara DW, Douglas SD, Luzuriaga K, McFarland EJ, Yogev R, Rathore MH, Levy W, Graham BL, Spector SA; Pediatric AIDS Clinical Trials Group. Lymphocyte subsets in healthy children from birth through 18 years of age: the Pediatric AIDS Clinical Trials Group P1009 study. J AllergyClinImmunol. 2003. 112(5). 973-80. doi: 10.1016/j.jaci.2003.07.003.De Sanctis, J.B.; Garmendia, J.V.; Hajdúch, M. Overview of Memory NK Cells in Viral Infections: Possible Role in SARS-CoV-2 Infection. Immunol. 2022. 2. 52-67. https://doi.org/10.3390/immuno2010005.De Sanctis, J.B.; Garmendia, J.V.; Hajdúch, M. Overview of Memory NK Cells in Viral Infections: Possible Role in SARS-CoV-2 Infection. Immunol. 2022. 2. 52-67. https://doi.org/10.3390/immuno2010005.Duygu B, Olieslagers TI, Groeneweg M, Voorter CEM, Wieten L. HLA Class I Molecules as Immune Checkpoints for NK Cell Alloreactivity and Anti-Viral Immunity in Kidney Transplantation. FrontImmunol. 2021. 12. 680480. doi: 10.3389/fimmu.2021.680480.Duygu B, Olieslagers TI, Groeneweg M, Voorter CEM, Wieten L. HLA Class I Molecules as Immune Checkpoints for NK Cell Alloreactivity and Anti-Viral Immunity in Kidney Transplantation. FrontImmunol. 2021. 12. 680480. doi: 10.3389/fimmu.2021.680480.Кузник Б.И, Максимова О.Г. Общая гематология. Гематология детского возраста. Учебное пособие. Ростов н/ Д. Феникс 2007. 573.Kuznik B.I., Maksimova O.G. General hematology. Hematology of childhood. Tutorial. Rostov n / D. Phoenix 2007. 573.Ali R.A., Wuescher L.M., Worth R.G. Platelets: essential components of the immune system. CurrTrendsImmunol. 2015. 16. 65-78.Ali R.A., Wuescher L.M., Worth R.G. Platelets: essential components of the immune system. CurrTrendsImmunol. 2015. 16. 65-78.Богомягкова Е.Н., Солпов А.В., Терешков П.П., Трушина Н.П., Витковский Ю.А. Возрастные изменения содержания αβ-, γδ-т-лимфоцитов и их некоторых минорных субпопуляций у здоровых детей. Иммунология. 2021. 42(5). 526-535. DOI: 10.33029/0206-4952-2021-42-4-526-535Bogomyagkova E.N., Solpov A.V., Tereshkov P.P., Trushina N.G., Vitkovsky Yu.A. Age-related changes in the content of αβ-, γδ-T-lymphocytes and some its minor subpopulations in healthy children. Immunologia. 2021. 42(5). 526-535. DOI: 10.33029/0206-4952-2021-42-4-526-535. in Russian.Богомягкова Е.Н., Солпов А.В., Витковский Ю.А., Терешков П.П. Cодержание коагрегатов тромбоцитов с αβ-, γδ-T-лимфоцитами и их некоторыми минорными субпопуляциями в крови у здоровых детей. Иммунология. 2022. 43(1). 78-88. DOI: 10.33029/0206-4952-2021-42-6-78-81/8Bogomyagkova E.N., Solpov A.V., Tereshkov P.P., Vitkovsky Yu.A. The content of platelet co- aggregates with αβ-, γδ-T-lymphocytes and their some minor subpopulations in the blood of healthy children. Immunologia. 2022. 43(1). 78-88. DOI: 10.33029/0206-4952-2021-42-6-78- 88. in Russian.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.